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光合细菌的培养操作教程

2013/5/27 13:49:08   文章来源:强微生物科技   浏览次数:22207
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光合细菌培养技术高清视频网址:http://www.hl99cn.com/show.asp?newsid=2371

 

1、配制光合细菌菌液:

(1)配制比例:

光合细菌培养基、清水、菌种的配制比例为:0.5:80:20。

示例1: 0.5公斤(500克)培养基 + 80升水 + 20升菌种(接种),配成100升的光合细菌菌液。

示例2(少量培养): 0.05公斤(50克)培养基 + 8升水 + 2升菌种(接种),配成10升的光合细菌菌液。

(2)配制方法:

下面以配制100升光合细菌菌液为例来说明配制方法:

① 溶化培养基:取培养基0.5公斤(500克),用少量水溶化(可以用50℃左右的热水,溶化培养基的速度会快些),搅拌均匀,然后倒入一个容量在100升以上的容器中;

② 配制培养液:往容器中加水到80升,80升培养液配制完成;

③ 接种:再加入20升菌种,并搅匀, 100升菌液配制完成;

④ 装瓶(袋):将配制好的菌液装入干净的透明容器(瓶、壶、塑料袋等),容器中留5%的空气在里面,密封待用。

菌液配制说明及注意事项:

a. 以上各成分的数量是以配制100升菌液为例来说明配制方法的,如配制其他数量的光合细菌菌液,各成分数量按比例增减即可;

b. 培养用水源的选择:

一般含杂菌较低的清洁淡水、海水或加粗食盐的淡水都可以,如井水、河水、自来水、蒸馏水和纯净水等,甚至干净的池塘水也行。

从经济、实用的角度考虑,地下水(如井水)含杂菌低,是最理想的培养水源;

清洁的地表水也可使用,如河水、池塘水等;

含氯量较高的自来水应敞口放置两天或调PH值至偏碱后使用;

蒸馏水及纯净水固然很好,但成本太高,可用于提纯菌种;

c. 培养用容器的选择:

必须为透明容器并清洗干净,透明的容器可让光合细菌最大限度的吸收到充分的光线,少量培养如饮料瓶、食用油壶等,规模培养如透明塑料桶、透明塑料袋等。

d. 菌种的接种量:

一般接种量为20-50%,即培养液与菌种的比例为4:1(4升培养液加1升菌种)到1:1(1升培养液加1升菌种),接种量最低不能低于20%。

接种量越高,光合细菌菌种越容易形成优势菌群而抑制其他杂菌生长,培养速度快,且培养成熟的浓度更高。但产出效率也越低,光合细菌易老化。

接种量越低,培养产出效率越高,但如果低于20%的接种量,光合细菌不容易形成优势菌群,培养初期易染杂菌,培养的成功率低。

我们推荐的接种量为20%,如果用太阳光培养,推荐的接种量为25-40%。

e. 容器不要装满培养液,留5%左右的空气在里面;实践证明, 光合细菌在微厌氧的条件下生长最好,也就是说,要留有一定的空气给它,又要适度的密封,光合细菌长得最好,还便于摇动均匀, 留一点空气在容器内,反而比不留空气长得快。

f. 如果有条件,您手上有PH试纸的话,可以测一下配好的菌液的PH值,一般菌液PH值在6.5-7.5之间;

2、光照培养:

通过以上操作,我们就有了配制好了的光合细菌菌液,现在,我们就要对菌液施以光照,这样,光合细菌有了培养基的营养物质,又获得了光照的能量,满足了光合细菌生长所需要的条件,光合细菌能够得到快速的生长和繁殖。

通过光照,菌液中的光合细菌开始生长,生长过程中,红色会越来越深,菌液越来越浑;几天后,菌液长成深红色并呈浑浊状态即为成熟,此时PH值为8.0-9.0。

根据您培养的数量,培养方法分为少量培养和规模培养;根据光照光源的不同,可分为灯泡培养和太阳光培养。

(1)少量培养:

如果您初次接触光合细菌,手上用于培养的菌种数量少,或者平时光合细菌用量较少,您可以采用少量培养的方法。

少量培养多使用白炽灯泡作光源,用白炽灯泡培养稳定性高,培养出来的光合细菌质量好,菌液浓度高,颜色鲜艳,可用作规模培养用的菌种。

少量培养方法非常简单,在气温高于30℃时(如夏季或春秋季里较热的时节),只需将菌液瓶围成一个圈,中间吊一个40-100W的白炽灯泡(钨丝灯,可发热的),灯泡与瓶子距离在10-20公分,准备一个温度计监测培养温度,控制培养温度在30-38℃之间;

在气温低于30℃时(如冬季或春秋季里较冷的时节),我们可以使用纸箱保温培养,或用塑料布将全部菌液和灯泡遮盖起来以保温。

使用纸箱培养,用白炽灯泡作光源对菌液进行光照,同时灯泡本身发热,纸箱起保温作用,可提升纸箱内温度。

制作培养用纸箱:准备一个纸箱(如电脑纸箱、电视机纸箱等),纸箱顶部开一小半口(方便取放菌液瓶子),纸箱中间悬挂一个40-100瓦的白炽灯(钨丝灯,可发热的),在纸箱侧边钻一个小洞,从小洞中插入一根温度计(方便掌握箱内温度),如右图:

箱内控制培养温度在30-38℃之间,温度太高可以在纸箱上戮孔散热或敞开培养,温度太低可以盖住纸箱上口,或在纸箱外用保温材料(如旧衣服、旧棉被等)加以包裹以提升箱内温度。

少量培养说明及注意事项:

① 灯泡与瓶子距离在10-20公分,太远光照强度弱,太近光照太强;

② 控制培养温度在30-38℃(菌液温度在28-35℃),最高不超过40℃,最低不低于25℃

③ 菌液瓶子至少每天摇动2次。

④ 由于热胀冷缩,在培养一天后,可以旋开瓶盖,放气排压,再盖上。

⑤ 培养好的光合细菌,又可以当菌种用,无限循环培养下去,不会老化或退化。菌种要保存好,放在阴凉干燥有光线的地方,同时要注意:夏天三个月、其他季节六个月要转培养一次,以保证菌种活力。

(2)室内规模培养:

在地面制作小池子,用来固定将要放在里面的塑料培养袋(也可以用木方来固定),将菌液装入塑料薄膜袋子中(可以使用虾苗袋子),塑料薄膜袋子两头密封好,进行培养,见右图:

使用60-100瓦白炽灯,灯与液面距离为20公分左右,每平方米用2-3个,室内设置加热装置,夏天则不需要,主要是冬天需要加热,北方有暖气片,南方可以使用煤炉(注意把煤气用管道排出室外),南方冬天也可以用电热丝,不过比较耗电。

这种方法的缺点是无法搅拌。只能静止培养,培养时间稍长一点。

(3)太阳光培养:

用太阳光作为光源培养,只需把菌液用一个大的不易破损的塑料袋装好(注意:使用太阳光培养时,塑料袋的培养成功率最高,其次是5升装的食用油壶),放在太阳底下晒即可,夏天注意遮荫降温,并每天摇晃2次,以防温度过高烧死菌种。这样,不需要什么人工,放在那里过些日子就长成深红色了。

太阳光培养最容易出现的问题是:由于太阳光的光谱很广,除了有适合光合细菌生长的光线,还有适合其他杂菌生长的光线,如果不采取措施的话,其他杂菌(如绿藻等)也很容易生长和繁殖;另外,夏季太阳光还会造成菌液的水温过高,高于40℃后光合细菌会大量死亡。

我们可以采用以下措施防止绿藻污染:

1、适当遮荫,搭盖一到二层遮阳网,这样会滤掉大部分适合其他杂菌生长的光线而留下适合光合细菌生长的光线;

2、配制菌液时加大菌种的接种量,例:0.5公斤(500克)培养基 +80升水 +40升菌种(加大接种),配成120升的光合细菌菌液

3、菌液中适量加入一些盐,每100升菌液加盐1公斤左右

4、夏季高温注意降温。

注意,即使在培养过程中,出现了绿藻污染,长绿了,也不要放弃或倒掉,让它去,过一段时间,甚至一个月以上,它自然会长成深红色的,最终光合细菌会占绝对优势。

太阳光培养的颜色色泽没有室内白炽灯培养的好看、鲜艳。所以,如果是培养光合细菌作为商品出售的话,建议使用室内规模培养法,产品质量最稳定,菌液浓度高,颜色最好看,最鲜艳,商品性能好。

如果培养的光合细菌是自己的鱼塘使用,则可以采用偷懒一点的方法,即太阳光培养法。

有客户发明如下培养方法比较简单:挖一个土坑,深40公分左右,里面垫一层塑料薄膜用来盛培养液,倒入培养液,接好种,控制培养液的深度在30公分以内,再在液面上铺一层塑料薄膜(可形成一定的密闭环境,防止空气中杂菌污染),在太阳底下晒数日即长红,冬天则可在土坑上搭一塑料暖棚保温,也可在室内做一个这样的坑池,搭一塑料暖棚,内再放一火炉保温升温用,每半平方米悬一个100瓦白炽灯,离液面25公分之内。

阳光太强烈时,可以搭盖一层遮阳网。夏天防止温度过高。

光照培养说明及注意事项:

a、培养温度:

培养温度(水温)在15℃-40℃均能生长,培养成熟的时间不同。

15℃-25℃:虽然会生长,但生长速度慢,培养初期容易污染杂菌,菌液很浅;

25℃-30℃:4至6天达到生长旺盛期;

30℃-35℃:3至5天达到生长旺盛期,是比较理想的温度;

35℃-40℃:2至4天生长旺盛,第5天明显抑制,附壁下沉,光合细菌易老化;

40℃以上,光合细菌无法耐受,会大量死亡。

最理想温度(菌液温度):28℃-35℃,菌液质量最好,3-6天转为深红色。

b、培养光照强度:

光照强度1000-6000 lx均可生长,培养成熟的时间不同。

光照强度低于1000 lx,光线不足,速度慢,菌液浅,易污染杂菌。

超过4000 lx,菌液成熟快,易老化,附壁碎片沉淀,不易保存。

最理想1500-4000 lx,菌液质量好,生长速度也较快;

经我们用白炽灯泡测试结果如下:

(以下测试灯泡仅限于我们手中的灯泡,各地灯泡生产厂家和品牌不同会有差距,测试结果仅供参考)

40W白炽灯泡:距10cm处的光强度为1700 lx左右,距20cm处的光强度为600 lx左右;

60W白炽灯泡:距10cm处的光强度为4900 lx左右,距15cm处的光强度为2600 lx左右,距20cm处的光强度为1700 lx左右;

100W白炽灯泡:距10cm处的光强度为6700lx左右,距20cm处的光强度为3200lx左右;

c、培养时间:

第一次培养,可能需要较长的时间(可能6天以上),这是因为菌种有一个适应您当地水源的过程,在不断培养数代,菌种适应了水源后,可能3-5天就可以了。另外如果菌种放置时间久了,再拿来接种培养也需要较久的培养时间。

培养时间还与培养温度、光照强度和PH值有关,一般来说,温度、光照强度和PH值越高,培养时间越短,越低,培养时间越长。

光合细菌生长过程中,红色会越来越深,菌液越来越浑;几天后,菌液长成深红色并呈浑浊状态即为成熟,此时PH值为8.0-9.0。

d、菌液的搅拌(摇动)

光合细菌培养过程中必须搅拌(摇动),作用是帮助沉淀的光合细菌上浮获得光照,保持菌细胞的良好生长。

菌液每天至少搅拌(摇动)2次。

每天搅拌(摇动)的次数越多,光合细菌生长得也越快。

e、菌液是否要完全密封培养:

实践证明, 光合细菌是在微厌氧的条件下生长最好,也就是说,要留有一定的空气给它,又要适度的密封,如在小规模的纸箱培养试验中,在饮料瓶中留有5%的空气,光合细菌长得最好,这样还便于摇动均匀, 留一点空气在容器内,反而比不留空气长得快。

f、太阳光培养:

使用太阳光培养,注意一定不能让阳光直射到菌液上,可以在屋檐下、大树下培养,如直接在阳光下应适当遮阴,搭盖一到二层遮阳网。夏天要防止温度过高。

g、培养参数总结:

(1)培养基、清水、菌种的比例: 0.5:80:20

例: 0.5公斤(500克)培养基+80升水+20升菌种,配成100升的光合细菌菌液;

(2)盛装菌液的容器:必须为透明容器并清洗干净,如饮料瓶、食用油壶、透明塑料桶、透明塑料袋等。

(3)配制成的菌液酸碱度(PH)值:6.5-7.5最佳;

(4)菌液温度:28℃-35℃最佳(适应范围15℃-40℃)。

(5)光照度:1500LX-4000LX最佳。每25升菌液使用1个60瓦左右的电灯泡进行光照,菌液距离灯泡10-20cm。

(6)培养好的光合细菌,又可以当菌种用,无限循环培养下去,不会老化或退化。菌种要保存好,放在阴凉干燥地方,同时要注意:夏天三个月、其他季节六个月要转培养一次,以保证菌种活力。

3、培养过程中菌液可能出现的问题及对策

(1)、变淡

原因:接种量过少,使用的水源含杂菌太多,菌种老化、杂菌过多,PH值过低或过高,光照不足,温度过低或过高,水的硬度过高。

对策:调节至正常状态。

(2)、变黑

原因:多见于使用敞开培养的方法,菌液污染了杂菌;或气温较高的季节,刚培养好的菌液因长时间失去光照。

对策:更换菌种重新培养或施以光照。

(3)、变绿

原因1菌液中绿硫菌大量繁殖,多见于高温季节使用太阳光培养而没有遮阴。

对策:更换菌种重新培养,加大菌种的接种量,使用太阳光培养时搭盖一到二层遮阳网遮阴,并注意温度不要超过40℃;还可每100升加入0.1-0.2公斤食盐(淡水培养)或1-2公斤食盐(海水培养)。

原因2可能是某些红螺菌科的某些菌侏,在严格厌氧的情况下也会产生此现象

对策:继续连续多次密闭培养。

(4)、变灰

原因:接种量少,菌种不纯,光照不足,PH值过低。

对策:选用优质菌种,按要求接种,增强光照,调适PH值。


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